(Atividade da caspase e marcadores apoptóticos nos espermatozóides de ejaculado humano).
Weng S.L., Taylor S., Morshedi M., Schuffner Alessandro., Duran E.H., Beebe S., Oehninger S. Molecular Human Reproduction 2002, 8(11);984-91.
Os objetivos deste estudo foram determinar se espermatozóides humanos ejaculados exibem caspases ativas e se marcadores apoptóticos casapse-dependentes são identificáveis. Espermatozóides de doadores férteis e de pacientes inférteis foram examinados após separação por gradiente em frações livres de leucócitos com alta e baixa motilidade. Espermatozóides foram avaliados por parâmetros de motilidade, morfologia, ativação da caspase, e marcadores de apoptose, incluindo translocação da fosfatidilserina (ligação com anexina V) e fragmentação de DNA (TUNEL). A caspase-3 ativa foi detectada por microscopia imunofluorescente numa pequena proporção de espermatozóides in situ, em frações de alta e baixa motilidade de pacientes e doadores, mas frações com baixa motilidade tiveram números significativamente maiores de espermatozóides positivos. A análise imunoblot detectou procaspase-3 inativa (32 kDa) em todas as frações de espermatozóides com baixa motilidade de pacientes e doadores, enquanto caspase-3 ativa (17kDa) foi encontrada somente num número limitado de frações com baixa motilidade de pacientes, e em ainda menos frações de doadores. A atividade enzimática da caspase, mensurada utilizando substrato fluorogênico DEVD-afe, foi maior em pacientes nas frações de alta e baixa motilidade. A coloração da anexina 5 e fragmentação de DNA foram detectadas na proporção dos espermatozóides, com uma maior freqüência nas frações com baixa motilidade. Uma correlação positiva entre caspase-3 ativa in situ na peça intermediária do espermatozóide e fragmentação de DNA foi observada nas frações com baixa motilidade de pacientes, sugerindo que mecanismos apoptóticos caspase-dependentes podem ser originados na gota citoplasmática ou na mitocôndria e ter ação no núcleo. Estes dados sugerem que em algumas populações de ejaculado, caspases são presentes e podem aumentar a translocação de fosfatidilserina e fragmentação de DNA.